Preparação do Monte Molhado de Bactérias para Observar sua Forma Natural e Tamanho

Objetivo preparar a montagem molhada de uma bactéria, por observar a sua forma natural, tamanho e acordo na condição viva.

Objetivo:

Células bacterianas podem ser vistas fácil e claramente, quando coloridas por manchas, mas na maioria dos processos de coloração, as células morrem e perdem sua forma e tamanho naturais devido à fixação de calor e à exposição a produtos químicos (manchas, ácido e álcool).

O objetivo deste experimento é observar a forma natural, tamanho e disposição das bactérias em condições de vida. Motilidade não pode ser observada em montagem molhada, como as células são pressionadas entre o slide e a lamínula.

Princípio:

Na montagem húmida, uma gota da suspensão de bactérias é colocada numa lâmina, coberta com uma lamínula e observada sob um microscópio composto ou, de preferência, sob um microscópio de campo escuro ou de contraste de fase, utilizando uma objetiva de imersão em óleo.

Materiais requisitados:

Lâmina de vidro, lamínula, vaselina, óleo de imersão (óleo de lã de cedro ou parafina líquida), cultura bacteriana (em meio sólido ou em suspensão líquida), alça e microscópio (composto, campo escuro ou contraste de fase).

Procedimento:

1. Um escorregador é limpo adequadamente sob água da torneira, de modo que a água não permaneça como gotas em sua superfície (Figura 5.2).

2. A lâmina é seca com papel absorvente e, em seguida, movendo-se sobre a chama ou mantendo-se ao sol.

3. Se a bactéria foi cultivada em um meio sólido (como cultura inclinada ou cultura de placa), uma gota de água destilada é colocada no centro da lâmina. Um laço é esterilizado aquecendo-o sobre uma chama a quente vermelho. Ele é resfriado à temperatura ambiente. Então, assepticamente, uma pequena porção da cultura de bactérias é raspada pelo laço e transferida para a gota de água.

Uma suspensão de bactérias é feita misturando suavemente a alça de bactérias na gota de água, de forma que a gota não se espalhe. Se cultivada em um meio líquido como suspensão, assepticamente uma gota da suspensão de bactérias é colocada no centro da lâmina diretamente, usando um laço esterilizado por chama.

4. Geleia de petróleo ou material semelhante é aplicado ao redor da gota, de modo que, quando a lamínula cobrir a gota, a evaporação e o efeito da corrente de ar sejam minimizados.

5. Uma lamínula é mantida em uma posição inclinada próxima à gota de suspensão de bactérias com uma borda tocando a lâmina.

6. Lentamente, a lamínula é baixada até tocar a superfície da gota.

7. Em seguida, a lamínula é liberada, de modo que a suspensão da gota de bactérias se espalhe em todas as direções sob a lamínula. Cuidados devem ser tomados, para que nenhuma bolha de ar seja formada na suspensão.

8. O slide é recortado no palco de um microscópio composto e observado usando baixa potência e alta objetiva seca. Em seguida, uma gota de óleo de imersão é colocada na lamínula e observada usando o objetivo de imersão em óleo do microscópio. De preferência, um microscópio de contraste de fase ou campo escuro deve ser usado para observação clara.