Teste de oxidação-fermentação em bactérias para descobrir sua capacidade de utilizar a glicose (com figura)

Teste de oxidação-fermentação em bactérias para descobrir sua capacidade de utilizar glicose aerobicamente (oxidativamente) ou anaerobicamente (fermentativamente)!

Princípio:

Algumas bactérias têm a capacidade de utilizar glicose. Alguns deles o utilizam apenas na presença de oxigênio (dativa ou aerobicamente), enquanto os outros, além de utilizar aerobicamente, também podem utilizá-lo na ausência de oxigênio (fermentativa ou anaeróbica).

Assim, uma bactéria capaz de fermentar a glicose deve ser capaz de oxidá-la, mas uma bactéria capaz de oxidar a glicose pode não fermentá-la. Se a glicose é utilizada de qualquer maneira, o ácido é produzido, o que reduz o pH mudando a cor do roxo de bromocresol de roxo para amarelo.

No teste de oxidação-fermentação (Teste O / F), as bactérias de teste são cultivadas aerobicamente e anaerobicamente separadamente, em tubos de ágar semi-sólidos contendo glicose e púrpura de bromocresol. Se as bactérias têm a capacidade de utilizar glicose, a cor do meio muda de púrpura para amarelo. Se utiliza glicose aerobicamente, é oxidativo e se utiliza glicose anaerobicamente, é fermentativo.

Materiais requisitados:

Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, jarra de descarte, incubadora, caldo de glicose Hugh-Leif-son, parafina líquida, colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.

Procedimento:

1. Os ingredientes do meio de caldo de glicose de Hugh-Leifson (HLGB) (contendo glicose e púrpura de bromocresol como componentes principais) ou o pó pronto para 100 ml do caldo são pesados ​​e dissolvidos em 100 ml de água destilada Balão cónico de 250 ml, agitando e agitando (figura 7.9).

2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 7, 4 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se for menor.

3. Após o ajuste do pH, o ágar é adicionado. Menos agar é usado aqui para obter um meio semi-sólido, de modo a facilitar a facada.

4. O balão é aquecido para dissolver o ágar no meio completamente.

5. Antes de solidificar, o meio em estado de fusão quente é distribuído em dois conjuntos de tubos de ensaio (aproximadamente 5 ml cada); cada conjunto com cinco tubos de ensaio.

6. Os tubos de ensaio são revestidos de algodão, cobertos com papel craft e amarrados com fio ou elástico.

7. Os tubos de caldo são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave.

8. Os tubos de caldo são deixados a arrefecer até à temperatura ambiente.

9. A parafina líquida é esterilizada por aquecimento a 180 ° C durante 3 horas num forno de ar quente.

10. A bactéria teste é inoculada assepticamente, preferivelmente em uma câmara de fluxo laminar, em todos os tubos de caldo semi-sólidos esterilizados por apunhalamento com a ajuda de uma alça de inoculação esterilizada por chama. O laço é esterilizado após cada inoculação.

11. A parafina líquida esterilizada é suavemente vertida assepticamente para um conjunto de tubos inoculados, (cerca de 1 cm de altura no meio) para proporcionar uma condição anaeróbica.

12. Todos os tubos de caldo inoculados são incubados a 37 ° C durante 24 horas numa incubadora.

Observações:

A cor muda de roxo para amarelo em ambos os tubos: Fermentativo.

A cor só muda em tubos sem parafina: Oxidativa.

Nenhuma mudança de cor em qualquer tubo: as bactérias não podem utilizar glicose.