Teste de Redução de Nitrato em Bactérias para Descobrir a Capacidade de Reduzir Nitratos

Leia este artigo para aprender sobre o desempenho do teste de redução de nitrato em bactérias para descobrir sua capacidade de reduzir os nitratos!

Princípio:

Algumas bactérias têm a capacidade de reduzir os nitratos, pois podem produzir a enzima 'nitrato redutase'.

Esta enzima, na presença de doadores de elétrons adequados, reduz os nitratos (N0 ₃ ^- ) a nitritos (N0 ₂ ^- ). A presença de N0 ₂ ^- é indicada pelo ácido sulfanílico e a-naftilamina, que mudam de cor para vermelho.

No teste de redução de nitrato, a bactéria teste é cultivada em meio caldo contendo nitrato (N0 ₃ ^- ). Se a bactéria tem a capacidade de reduzir os nitratos, o caldo adquire uma cor vermelha com a adição de ácido sulfanílico e a-naftilamina.

Se a cor vermelha não for produzida, isso indica que N0 ₃ ^- não é reduzido pelas bactérias ou a bactéria produz enzima redutase de nitrato altamente potente, que reduz rapidamente N0 ₃ ^- além de N0 ₂ ^- para NH3 e N2. Para confirmar isso, uma pequena quantidade de pó de zinco é adicionada, o que reduz o NO ₃ ^-, se disponível no meio, para N0 ₂ ^-, produzindo assim a cor vermelha.

Assim, se a cor vermelha é produzida, indica que N0 ₃ ^- está presente no meio inalterado e as bactérias não têm a capacidade de reduzir os nitratos. Se a cor vermelha não for produzida, isso indica que o N0 ₃ ^- foi reduzido para além de N0 ₂ ^- para NH3 e N2 e a bactéria tem a capacidade de reduzir os nitratos.

Materiais requisitados:

Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de borbulhar, câmara de fluxo laminar, jarra, incubadora, caldo de nitrato, pó de zinco, reagente de nitrato Solução A, reagente de nitrato Solução B, colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.

Procedimento:

1. Os ingredientes do meio de caldo de nitrato (contendo nitrato como componente principal) ou o pó pronto a perfazer necessário para 100 ml do caldo são pesados e dissolvidos em 100 ml de água destilada num balão cónico de 250 ml, agitando e agitando ( Figura 7.10).

2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 7, 2 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se é menor. O frasco é aquecido, se necessário, para dissolver completamente os ingredientes.

3. O caldo é distribuído em cinco tubos de ensaio (aproximadamente 10 ml cada), tapado com algodão, coberto com papel craft e amarrado com fio ou elástico.

4. Os tubos de caldo são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave.

5. Os tubos de caldo são deixados a arrefecer até à temperatura ambiente.

6. As bactérias de teste são inoculadas assepticamente, preferivelmente em uma câmara de fluxo laminar, no caldo com a ajuda de uma alça de inoculação esterilizada sobre a chama de bunsen. O laço é esterilizado após cada inoculação.

7. Os tubos de caldo inoculados são incubados a 37 ° C durante 48 horas numa incubadora.

8. 0, 5 ml de cada reagente de nitrato A solução A (contendo ácido sulfanílico) e o reagente de nitrato A solução B (contendo a-naftilamina) é adicionada a cada tubo de ensaio, bem agitada e a mudança de cor é observada após 15 minutos.