Teste de Metil Vermelho Para Descobrir a Capacidade de uma Bactéria em Utilizar a Glicose (Com Figura)
Leia este artigo para aprender sobre o teste do vermelho de metila (teste de RM), para descobrir a capacidade de uma bactéria utilizar a glicose com a produção de um ácido estável como produto final!
Princípio:
Algumas bactérias têm a capacidade de utilizar a glicose e convertê-la em um ácido estável como ácido láctico, ácido acético ou ácido fórmico como produto final.
Essas bactérias inicialmente metabolizam a glicose em ácido pirúvico, que é posteriormente metabolizado pela via do ácido misto para produzir o ácido estável.
O tipo de ácido produzido difere de espécie para espécie e depende das vias enzimáticas específicas presentes nas bactérias. O ácido assim produzido diminui o pH para 4, 5 ou abaixo, o que é indicado por uma mudança na cor do vermelho de metila de amarelo para vermelho.
No teste do vermelho de metilo (teste MR), a bactéria de teste é cultivada em meio de caldo contendo glucose. Se a bactéria tiver a capacidade de utilizar glicose com a produção de um ácido estável, a cor do vermelho de metila muda de amarelo para vermelho, quando adicionada à cultura de caldo.
Materiais requisitados:
Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, frasco descartável, incubadora, caldo MR-VP (vermelho metil-Voges Proskauer ou caldo fosfato glicose), solução vermelha de metila, colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.
Procedimento:
1. Os ingredientes do meio de cultura MR-VP (contendo glucose como componente principal) ou o pó pronto a perfazer necessário para 100 ml de caldo são pesados e dissolvidos em 100 ml de água destilada num balão cónico de 250 ml, agitando e rodando. O caldo MR-VP também é chamado de caldo de fosfato de glicose (Figura 7.4).
2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 6, 9 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se for menor. O frasco é aquecido, se necessário, para dissolver completamente os ingredientes.
3. O caldo é distribuído em cinco tubos de ensaio (aproximadamente 10 ml cada), tapado com algodão, coberto com papel craft e amarrado com fio ou elástico.
4. Os tubos de caldo são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave.
5. Os tubos de caldo são deixados a arrefecer até à temperatura ambiente.
6. A bactéria teste é inoculada assepticamente, preferencialmente em uma câmara de fluxo laminar, no caldo com a ajuda de uma alça de inoculação esterilizada sobre a chama de bunsen. O laço é esterilizado após cada inoculação.
7. Os tubos de caldo inoculados são incubados a 37 ° C durante 24 a 48 horas numa incubadora.
8. Solução alcoólica de vermelho de metila (3-4 gotas) é colocada em cada tubo de ensaio.
Observações:
1. Cor vermelha produzida: positiva para RM (isto é, a bactéria converteu a glicose em um ácido estável, como indicado pela conversão do vermelho de metila de amarelo para vermelho. Indica fermentação ácida mista).
2. Cor vermelha não produzida: MR negativo (ou seja, a glicose no meio não foi convertida em ácido estável. Isso indica fermentação de butileno glicol).
