Teste de Leite Litmus em Bactérias para Descobrir sua Capacidade de Transformar Componentes de Leite em Produtos Finais

Teste de Leite Litmus em Bactérias para Descobrir sua Capacidade de Transformar Componentes de Leite em Produtos Finais!

Princípio:

Algumas bactérias têm a capacidade de crescer no leite e transformar diferentes componentes do leite em produtos finais variados. O leite é uma mistura complexa de vários componentes.

Os principais componentes capazes de transformação por bactérias são a lactose do açúcar do leite e as proteínas do leite caseína, lactoalbumina e lacto-globulina.

Diferentes bactérias têm diferentes sistemas enzimáticos, devido a que eles agem em diferentes componentes e os transformam em produtos finais metabólicos variados, que são características da bactéria.

O teste do litmus milk é realizado para descobrir a capacidade de uma bactéria de transformar diferentes componentes do leite, que se manifesta como alteração na cor do litmus, produção de gás, formação de coalhada, etc. Litmus é um indicador de pH e indicador de oxidação-redução. muda de cor dependendo da condição do caldo.

No teste do leite litmus, a bactéria de teste é cultivada em meio de caldo contendo leite e guloso. Se a bactéria tem a capacidade de transformar diferentes componentes do leite em produtos finais variados, ela cresce no caldo e transforma os componentes de diferentes maneiras, dependendo de seus sistemas enzimáticos.

As seis transformações mais importantes, que podem ser observadas no litmus milk como resultado de atividades bacterianas, são as seguintes:

(i) fermentação da lactose

ii) Formação de gás

iii) redução do litmus

iv) Formação de coalhada

v) Proteólise (Peptonização)

(vi) Reação alcalina

(i) Fermentação da lactose:

Bactérias capazes de usar lactose como fonte de carbono para produção de energia utilizam a enzima induzida por p-galactosidase e degradam a lactose em glicose e galactose. A glicose é ainda degradada através da via Embden-Meyerhof para o ácido pirúvico, que por sua vez é convertido em ácido láctico. A acumulação de ácido láctico reduz o pH do meio para cerca de 4, 0, devido ao qual a cor do litmus muda de púrpura a um pH neutro para rosa a pH ácido.

ii) Formação de gás:

Os produtos finais da fermentação bacteriana da lactose podem incluir gases como dióxido de carbono e hidrogênio. A presença desses gases pode ser vista como separações da coalhada ou pelo desenvolvimento de trilhas ou fissuras dentro da coalhada, à medida que os gases sobem à superfície.

iii) Redução de Litmus:

A fermentação é um processo anaeróbico envolvendo oxidação que ocorre na ausência de oxigênio molecular. A oxidação pode ocorrer por adição de oxigênio ou remoção do íon hidrogênio. A fermentação da lactose, sendo um processo anaeróbico, envolve a remoção do íon hidrogênio a partir dela.

Como o íon hidrogênio não pode existir no Estado Livre, deve haver um aceptor do íon hidrogênio. No teste do litmus, o litmus atua como aceitador do íon hidrogênio. Litmus é púrpura no estado oxidado, mas quando aceita hidrogênio, torna-se reduzido e se torna branco ou cor de leite.

(iv) Formação de Coalho:

As atividades bioquímicas de diferentes bactérias cultivadas no leite litmus podem resultar na produção de dois tipos distintos de coalhos (coágulos). A coalhada é designada como "coalhada ácida" ou "coalho de coalho", dependendo do mecanismo bioquímico responsável pela sua formação.

No caso da coalhada ácida, o ácido láctico ou outros ácidos orgânicos, na presença de iões de cálcio, provocam a precipitação da proteína do leite, a caseína como o caseinato de cálcio para formar um coágulo insolúvel. O coágulo é duro e não se retrai da parede do tubo de ensaio. Uma coalhada ácida é facilmente identificada se o tubo de ensaio estiver invertido e o coágulo permanecer imóvel.

No caso da coalhada de coalho, algumas bactérias produzem renina, uma enzima que atua na caseína para formar a paracaseína, que, na presença de íons de cálcio, é precipitada como paracaseinato de cálcio e forma um coágulo insolúvel. Ao contrário da coalhada ácida, trata-se de um coágulo semissólido macio que flui lentamente, quando o tubo de ensaio é inclinado.

v) Proteólise (Peptonização):

Algumas bactérias, que não têm a capacidade de obter energia pela fermentação da lactose, usam outras fontes nutricionais, como as proteínas, para esse fim. Por meio de enzimas proteolíticas, essas bactérias hidrolisam as proteínas do leite, principalmente a caseína, em seus blocos básicos de construção, ou seja, os aminoácidos.

O ligamento torna-se roxo profundo na porção superior do tubo, enquanto o meio começa a perder corpo e produz uma aparência translúcida, semelhante ao soro do leite, à medida que as proteínas são hidrolisadas em aminoácidos.

(vi) Reação alcalina:

Uma reação alcalina é evidente, quando a cor do meio permanece inalterada ou muda para azul profundo. Esta reacção é indicativa da degradação parcial da caseína por bactérias em cadeias polipeptídicas mais curtas, com a libertação simultânea de produtos finais alcalinos que são responsáveis ​​pela alteração de cor observável.

Materiais requisitados:

Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, jarra de descarte, incubadora, caldo de leite litmus, colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.

Procedimento:

1. Os ingredientes do meio de caldo de leite litmus ou o seu pó preparado necessário para 100 ml do caldo são pesados ​​e dissolvidos em 100 ml de água destilada num balão cónico de 250 ml, agitando e agitando (figura 7.12).

2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 6, 8 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se for menor. O frasco é aquecido, se necessário, para dissolver completamente os ingredientes.

3. O caldo é distribuído em cinco tubos de ensaio (aproximadamente 10 ml cada), tapado com algodão, coberto com papel craft e amarrado com fio ou elástico.

4. Os tubos de caldo são esterilizados a 121 ° C por 15 minutos em autoclave.

5. Os tubos de caldo são deixados a arrefecer até à temperatura ambiente.

6. A bactéria teste é inoculada assepticamente, preferencialmente em uma câmara de fluxo laminar, no caldo com a ajuda de uma alça de inoculação esterilizada sobre a chama de bunsen. O laço é esterilizado após cada inoculação.

7. Os tubos de caldo inoculados são incubados a 37 ° C durante 24 a 48 horas numa incubadora.

Observações:

1. Cor do caldo muda para rosa: fermentação de lactose.

2. O caldo transforma-se em coalhada sólida com fissuras: formação de gás.

3. Cor do caldo muda para branco com anel roxo no topo: redução de Litmus.

4. O caldo transforma-se em coalhada sólida branca com anel roxo no topo: Formação de coalhada.

5. Caldo torna-se parecido com soro de leite translúcido com anel roxo profundo no topo: Proteólise.

6. A cor do caldo permanece inalterada ou muda para azul profundo: reação alcalina.