Teste fornecido por hidrogênio em bactérias para descobrir sua capacidade de produzir hidrogênio (com figura)

Leia este artigo para aprender sobre o teste fornecido por hidrogênio em bactérias para descobrir sua capacidade de produzir hidrogênio!

Princípio:

Algumas bactérias têm a capacidade de reduzir o enxofre a sulfeto de hidrogênio. É um gás incolor, que reage com o ferro (sais ferrosos) para produzir precipitados negros de sulfeto ferroso.

Ele também reage com o acetato de chumbo para produzir precipitados negros de sulfeto de chumbo. O teste de sulfeto de hidrogênio (teste H, S) pode ser feito de duas maneiras, com base na fonte de enxofre.

Eles são os seguintes:

(Eu) Teste de H2S usando fonte inorgânica de enxofre

ii) Teste de H2S usando fonte orgânica de enxofre

(i) Teste de H2S usando fonte inorgânica de enxofre:

Neste teste, a bactéria de teste é cultivada em agar triplos de ágar-ágar-ágar (TSI agar slants), que contêm glucose, sacarose, lactose, vermelho de fenol, tiossulfato de sódio e sulfato ferroso. Se a bactéria utilizar o enxofre inorgânico (tiossulfato de sódio) usado no meio, é produzido H ₂ S, que combina com o sulfato ferroso no meio para formar precipitados negros de sulfeto ferroso, resultando em uma mudança na cor da coronha para preto. .

Além de utilizar enxofre inorgânico, se a bactéria puder utilizar qualquer um dos três açúcares (glicose, sacarose ou lactose), o ácido é produzido, o que reduz o pH do meio. Como resultado, a cor da inclinação muda de vermelho para amarelo.

Materiais requisitados:

Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, agulha de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, frasco descartável, incubadora, ágar triplo de açúcar (TSI agar), colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.

Procedimento:

1. Os ingredientes do meio TSI agar (contendo os três açúcares e o ferro como componentes principais) ou o pó pronto a perfazer, necessário para 100 ml de meio, são pesados e dissolvidos em 100 ml de água destilada num balão cónico de 250 ml. agitando e agitando (Figura 7.13).

2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 7, 4 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se for menor.

3. O balão é aquecido para dissolver completamente o ágar no meio.

4. Antes de solidificar, o meio em estado de fusão quente é distribuído em 5 tubos de teste (aproximadamente 20 ml cada).

5. Os tubos de ensaio são revestidos de algodão, cobertos com papel craft e amarrados com fio ou elástico.

6. Eles são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave.

7. Após a esterilização, eles são removidos da autoclave e mantidos em uma posição inclinada para resfriar e solidificar o meio, de modo a obter inclinações de ágar TSI.

8. A bactéria de teste é inoculada assepticamente, preferivelmente em uma câmara de fluxo laminar, nas inclinações, perfurando a parte superior e estriando na superfície das lâminas com a ajuda de uma agulha esterilizada por chama. A agulha é esterilizada após cada inoculação.

9. As lâminas inoculadas são incubadas a 37 ° C por 24 horas em uma incubadora.

Observações:

1. A cor da cor muda para preto: H ₂ S positivo.

2. A cor da coronha não muda para preto: H ₂ S negativo.

(ii) Teste de H2S usando fonte orgânica de enxofre

Neste teste, a bactéria de teste é cultivada em caldo de cisteína, que contém cisteína como fonte orgânica de enxofre. Se a bactéria utiliza o enxofre orgânico (cisteína) usado no meio com a ajuda de sua enzima 'cisteína dessulfurase', produz-se H2S. Este H2S combina com o acetato de chumbo embebido em um papel para formar precipitados pretos de sulfeto de chumbo, resultando em uma mudança na cor da tira de papel para preto.

Materiais requisitados:

Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, jarra, incubadora, caldo de cisteína, tiras de papel filtro Whatman, solução de acetato de chumbo (saturada), colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.

Procedimento:

1. Os ingredientes do meio de caldo de cisteína (contendo a cisteína como componente principal) ou o seu pó pronto necessário para 100 ml do caldo são pesados e dissolvidos em 100 ml de água destilada num balão cónico de 250 ml, agitando e agitando ( Figura 7.14).

2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 7.5 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se for menor. O frasco é aquecido, se necessário, para dissolver completamente os ingredientes.

3. O caldo é distribuído em cinco tubos de ensaio (aproximadamente 10 ml cada), tapado com algodão, coberto com papel craft e amarrado com fio ou elástico.

4. Os tubos de caldo são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave.

5. Os tubos de caldo são deixados a arrefecer até à temperatura ambiente.

6. A bactéria teste é inoculada assepticamente, preferencialmente em uma câmara de fluxo laminar, no caldo com a ajuda de uma alça de inoculação esterilizada sobre a chama de bunsen. O laço é esterilizado após cada inoculação.

7. Uma pequena tira de papel embebida em solução de acetato de chumbo (saturada) é fixada na boca de cada tubo de ensaio de tal maneira que uma parte longa dele permaneça dentro do tubo de ensaio e uma pequena porção fique do lado de fora.

8. Os tubos de caldo inoculados são incubados a 37 ° C durante 48 horas numa incubadora.