Experiência para realizar coloração básica de bactérias para observar sua forma, tamanho e arranjo

Objetivo de realizar simples coloração básica de bactérias, para observar sua forma, tamanho e disposição.

Objetivo:

Não é possível observar a forma natural, tamanho e arranjo de bactérias por coloração básica, pois essas características são distorcidas pela fixação de calor.

Além disso, algumas bactérias (por exemplo, spirilli) são difíceis de serem coradas.

Assim, a coloração negativa é realizada por dois motivos, como segue:

(uma) Observar a forma natural, o tamanho e o arranjo das bactérias, já que não é feita nenhuma fixação de calor aqui.

b) Para observar essas bactérias, que são difíceis de serem coradas?

Princípio:

Células de bactérias carregam carga negativa em sua superfície, devido a que elas são cercadas por cátions, como Na ⁺ e K ⁺ (Figura 5.9). Na coloração acídica, é utilizada uma coloração acídica, que ioniza num cromogénio aniónico (ião de cor carregado negativamente) e num catião.

Os cromogênios carregados negativamente são repelidos pelas cargas negativas de superfície nas células das bactérias, devido às quais o corante não pode penetrar na célula. Agora, as células não coradas são facilmente discerníveis contra o fundo colorido.

Materiais requisitados:

Slides, loop, mancha ácida (eosina / nigrosina), caldo / placa / cultura de bactérias, microscópio, óleo de imersão.

Procedimento:

1. Um escorregador é limpo adequadamente sob água da torneira, de modo que a água não permaneça como gotas em sua superfície (Figura 5.10).

2. A água aderente é eliminada com papel absorvente e a lâmina é seca ao ar.

3. Uma pequena gota da mancha ácida (nigrosina / eosina) é colocada perto de uma extremidade da lâmina.

4. Um loop é esterilizado sobre a chama e resfriado. Assepticamente, uma alça de bactérias da placa de ágar ou inclinação ou uma alça de suspensão de bactérias de um caldo líquido é transferida para a gota de mancha. Uma suspensão de bactérias na mancha é feita misturando suavemente a alça de bactérias na gota da mancha, de tal forma que a gota não se espalhe.

5. Outra lâmina limpa é mantida em um ângulo de 30 ° em relação ao primeiro deslize, de tal forma que, uma borda estreita da primeira toca a superfície da última para a extremidade sem a queda da mancha.

6. Nessa posição inclinada, o segundo deslize é puxado para frente em direção à queda de mancha, até que sua borda apenas toque a gota e a gota se espalhe ao longo de sua borda.

7. Nessa posição inclinada, o segundo deslize é empurrado para trás para formar um esfregaço fino de bactérias.

8. O esfregaço é seco ao ar. A fixação de calor não é feita aqui.

9. O slide é preso ao estágio do microscópio e o esfregaço é observado sob baixa potência e alta objetiva seca.

10. Uma gota de óleo de imersão é colocada no esfregaço.

11. O esfregaço é observado sob o objetivo de imersão em óleo.

Observações (sob o objetivo de imersão em óleo):

1. Forma das bactérias:

Esférico (coccus)

Em forma de bastonete (bacilos)

Comma-like (vibrio)

Espiral (espiroqueta)

2. Arranjo de bactérias:

Pares (diplobacillus / diplococcus)

Em fours (tetrads)

Em cadeias (streptococcus / streptobacillus)

Cachos semelhantes a uva (estafilococos)

Cuboidal (sarcinae ou octeto)

3. Tamanho das bactérias:

Por estimativa de olho, faça o desenho do campo sob o objetivo de imersão em óleo.