Experiência: Teste de Motilidade de uma Bactéria: por Suspensão Preparação de Gota (Com Figura)
O objetivo é realizar o teste de motilidade de uma bactéria, suspendendo a preparação da gota, para descobrir se é móvel ou não móvel.
Objetivo:
Motilidade significa capacidade de movimento pelo próprio poder. Com base na motilidade, as bactérias podem ser divididas em dois grupos como se segue.
(1) Bactérias Móveis:
Uma bactéria, que tem a capacidade intrínseca de se movimentar no meio circundante, na qual permanece suspensa, é uma bactéria móvel.
(2) Bactérias sem mobilidade:
Uma bactéria, que não tem a capacidade intrínseca de se movimentar no meio circundante, na qual permanece suspensa, é uma bactéria não móvel. Bactérias não móveis podem apresentar motilidade aparente, resultante do movimento browniano causado pelo bombardeamento das moléculas de água no meio circundante, nas células das bactérias.
Na montagem molhada, embora a forma e o tamanho das bactérias possam ser observados, a mobilidade pode ser dificultada, à medida que a suspensão é pressionada entre a corrediça e a lamínula. É por isso que; teste de gota suspensa ou teste de motilidade é realizado para observação clara da motilidade das bactérias, além de sua forma e tamanho. É útil na identificação de bactérias.
Princípio:
Uma pequena gota de suspensão de bactérias é pendurada do centro de uma lamínula na cavidade de uma lâmina de cavidade. A gota suspensa é observada sob um microscópio usando a objetiva de imersão em óleo. Se as bactérias são móveis, suas células podem ser vistas a ter movimento errático no meio circundante.
Em contraste, se não for móvel, suas células permanecem estáticas no meio, sem qualquer movimento, ou podem mostrar movimento browniano resultante do bombardeamento pelas moléculas de água no meio, nas células das bactérias.
Materiais requisitados:
Escorrimento da cavidade, lamínula, vaselina ou vaselina, óleo de imersão, caldo de cultura de bactérias, alça e microscópio de 24 horas (composto, campo escuro ou contraste de fase).
Procedimento:
1. Uma corrediça de cavidade é limpa adequadamente sob água da torneira, de modo que a água não permaneça como gotas em sua superfície. Uma lâmina de cavidade é uma lâmina de vidro com uma pequena depressão redonda no centro, na qual uma pequena gota de suspensão de bactérias pode ficar pendurada (Figura 5.3).
2. A lâmina é seca com papel absorvente e, posteriormente, movendo-a sobre a chama ou mantendo-a ao sol.
3. Um anel de vaselina (ou vaselina) é aplicado em torno da cavidade.
4. Um loop é esterilizado sobre a chama e resfriado. Uma polpa de bactérias é retirada da cultura de caldo de 24 horas assepticamente. Uma pequena gota da suspensão é colocada no centro de uma lamínula. O caldo de cultura não deve ter mais de 24 horas, porque as bactérias podem perder sua mobilidade à medida que envelhecem.
5. A corrediça da cavidade é invertida e colocada na lamínula, de tal forma que a cavidade cubra a gota.
6. O escorregador e a lamínula são pressionados juntos suavemente, para que a cavidade seja vedada. Cuidado deve ser tomado para ver que nenhuma parte da cavidade toca a gota.
7. O slide é invertido rapidamente, de tal forma que a queda trava na cavidade sem tocá-lo.
8. O slide é preso ao palco do microscópio.
9. A borda da gota é focalizada sob objetivo de baixa potência.
As razões para focar a borda da queda são as seguintes:
(a) Melhor contraste é obtido devido à diferença no índice de refração da gota e da lamínula.
(b) À medida que a gota se pendura, ela se afina em direção à borda, para a qual a borda contém menos número de bactérias a serem observadas claramente quanto à motilidade.
(c) Geralmente bactérias aeróbicas vêm em direção à borda para obter mais oxigênio para a respiração, para o qual elas podem ser observadas na borda.
10. Uma gota de óleo de imersão é colocada na lamínula logo acima da gota suspensa e a borda da gota suspensa é observada sob a objetiva de imersão em óleo do microscópio. De preferência, um microscópio de contraste de fase ou de campo escuro deve ser usado para observação clara.
Observações (sob o objetivo de imersão em óleo):
1. Motilidade:
Motile ou não-motile
2. Forma das bactérias:
Esférico (coccus)
Em forma de bastonete (bacilos)
Comma-like (vibrio)
Espiral (espiroqueta)
3. Arranjo de bactérias:
Pares (diplobacillus / diplococcus)
Em fours (tetrads)
Em cadeias (streptococcus / streptobacillus)
Cachos semelhantes a uva (estafilococos)
Cuboidal (sarcinae ou octeto).
4. Tamanho das bactérias:
Por estimativa de olho, faça o desenho do campo sob o objetivo de imersão em óleo.
(3) coloração:
Objetivo da coloração:
O índice de refração das células bacterianas é muito próximo ao da água, no qual elas são suspensas durante a observação e também àquelas da lâmina de vidro, nas quais são observadas ao microscópio. Portanto, é muito difícil observá-los claramente.
Para superar essa dificuldade, as células são coloridas por manchas, que conferem coloração profunda às células e cor clara ao meio circundante, no qual estão suspensas. As células de cores profundas obtêm um claro contraste com o fundo de cor clara e podem ser observadas com clareza.
Assim, a coloração é um método de conferir cor aos microrganismos transparentes sem cor, com a ajuda de vários corantes biológicos chamados "manchas" para a sua observação microscópica.
Química de Manchas:
Agentes de coloração são de três tipos, como segue:
1. Corantes:
Eles são usados para coloração de uso geral, como para coloração de materiais têxteis e para colorir paredes.
2. manchas:
Eles são usados para colorir amostras biológicas ou microbiológicas. Estes são mais precisos e exigentes.
3. Indicadores:
Eles são produtos químicos, que mudam de cor com a mudança na concentração de íons de hidrogênio (pH).
Embora "mancha" seja o termo apropriado, o termo "corante" é amplamente usado em microbiologia para significar agentes corantes. No passado, os corantes naturais foram preparados a partir de várias plantas. Eles foram amplamente substituídos por corantes sintéticos.
Como o primeiro corante sintético foi preparado a partir de anilina, todos os corantes sintéticos são chamados de 'corantes de anilina'. No entanto, a maioria destes corantes é agora produzida a partir do alcatrão de carvão, pelo qual são agora denominados "corantes de alcatrão de carvão". Os corantes de alcatrão de carvão são derivados de benzeno. Uma molécula de corante consiste em três componentes (Figura 5.4), conforme indicado abaixo.
a) Um anel de benzeno
(b) Um grupo cromóforo
c) Um grupo auxocromo
O benzeno é um solvente orgânico incolor, enquanto o cromóforo é o componente corante do corante. O benzeno combina-se com o cromóforo para formar o cromógeno (Figura 5.5). Como o cromógeno não possui a propriedade de se dissociar, ele não pode se combinar com as células e é lavado facilmente.
Quando um cromógeno combina com um auxocromo, um corante ou mancha é formado. O auxocromo confere a propriedade de dissociação eletrolítica (propriedade de formação de sal) ao corante. Assim, quimicamente uma coloração é definida como um composto orgânico contendo um anel benzeno, um grupo cromóforo e um grupo auxocromo.
Tipos de coloração:
Coloração de bactérias é de diferentes tipos, conforme descrito abaixo (Figura 5.6).
I. Coloração Simples:
Aqui, apenas uma mancha é usada. Esta coloração é usada para observar a forma (cocos, bacilos, vibrio, spirilli) e arranjo (único, par, tetrad, cadeia, cluster) de bactérias.
É de dois tipos da seguinte maneira:
A. Coloração Básica:
Na coloração básica, uma mancha básica, como o azul de metileno, violeta de cristal ou carbol fucsina, é usada para manchar as células das bactérias. A mancha liga-se fortemente às células bacterianas e transmite uma cor profunda da mancha às células, enquanto o meio circundante obtém uma cor clara da mancha.
B. Coloração Ácida:
Em coloração ácida, uma mancha ácida, como eosina ou nigrosina, é usada para manchar as células das bactérias negativamente. A mancha torna o colorido colorido, enquanto a célula bacteriana permanece incolor.
II. Coloração Diferencial:
Aqui, mais de uma mancha são usadas. É realizado para os seguintes fins.
A. Separação em Grupos:
Estes métodos de coloração diferencial são realizados para diferenciar as bactérias em diferentes grupos com base nas suas características de coloração.
Esses métodos incluem o seguinte:
(uma) Coloração de Gram:
Este método de coloração é realizado para diferenciar bactérias gram-positivas e gram-negativas.
b) Coloração ácido-rápida:
É realizado para diferenciar entre bactérias ácidas e não ácidas.
B. Visualização de Estruturas Específicas de Bactérias:
Estes métodos de coloração diferencial são realizados para visualizar componentes estruturais específicos de células de bactérias.
Esses métodos incluem o seguinte:
(uma) Coloração de esporos:
Este método de coloração é usado para manchar o endósporo de bactérias formadoras de esporos.
b) Coloração da Cápsula:
Este método é usado para manchar a cápsula, que envolve as bactérias capsuladas.
c) Coloração Flagelar:
É realizado para visualizar flagelos de bactérias flageladas.
d) Coloração de Inclusão:
Este método de coloração é realizado para corar as inclusões celulares de células bacterianas como grânulos de volutina, grânulos de glicogênio e grânulos de PBH.
