Experiência para identificação de bactérias desconhecidas (com figura)
Experiência para identificação de bactérias desconhecidas!
Princípio:
A identificação de bactérias desconhecidas é uma das principais responsabilidades dos microbiologistas. Amostras de sangue, tecidos, alimentos, água e cosméticos são examinadas diariamente em laboratórios em todo o mundo para a presença de microrganismos contaminantes.
Além disso, as organizações industriais estão constantemente examinando materiais para isolar novos micróbios ou micróbios produtores de antibióticos que aumentarão o rendimento de produtos comercializáveis, como vitaminas, solventes e enzimas. Uma vez isolados, esses micróbios desconhecidos devem ser identificados e classificados.
A ciência da classificação é chamada taxonomia e lida com a separação dos organismos vivos em grupos inter-relacionados. O Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8ª edição, é a chave taxonômica oficial contendo as ordens, famílias, gêneros e espécies de todas as bactérias classificadas conhecidas (Anexo III).
Com o conhecimento fundamental em métodos de coloração, técnicas de isolamento, nutrição bacteriana, atividades bioquímicas e características de crescimento de bactérias, torna-se mais fácil a identificação de qualquer bactéria desconhecida.
Características de poucas bactérias foram dadas na Tabela 7.2. Outras bactérias podem ser identificadas de forma semelhante com base nas observações e resultados obtidos após os procedimentos experimentais.
Materiais requisitados:
Slides, lâminas de cavidades, placas petri, frascos cônicos, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, jarra de descarte, incubadora, caldo nutriente, ágar nutriente, reagentes de coloração grama, meios e reagentes para testes bioquímicos, microscópio composto, colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.
Procedimento:
1. A coloração de Gram das bactérias desconhecidas é realizada. Além da coloração de gram, sua morfologia e arranjo também são registrados. O teste de motilidade das bactérias é determinado pela suspensão da preparação das gotas (Figura 7.25).
2. Utilizando a técnica de inoculação estéril, a bactéria é inoculada em duas lâminas de ágar nutriente, um tubo de caldo nutriente e uma placa de ágar nutriente por meio de inoculação por raia. Após a incubação, uma cultura inclinada é usada para determinar as características culturais das bactérias desconhecidas.
O segundo é usado como uma subcultura de estoque, caso seja necessário repetir qualquer um dos testes. Características de crescimento também são observadas no tubo de caldo e nas características da colônia na placa.
3. Exercendo cuidados na técnica estéril, de modo a não contaminar as culturas e, assim, obter resultados espúrios, as bactérias são inoculadas nos respectivos meios para realizar os diferentes testes bioquímicos.
4. Os meios inoculados são incubados nas temperaturas necessárias durante os períodos de tempo necessários.
Observações:
1. Na coloração de gram, além da reação gramatical, a morfologia e arranjo das bactérias também são registradas.
2. As características culturais das bactérias em caldo nutriente, em ágar inclinado e em placa nutriente de agar são observadas.
3. Os resultados das reações bioquímicas são registrados.
Interpretação de resultados:
1. Usando os dados registrados acima (por exemplo, veja a Tabela 7.1) e com a ajuda do Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, a bactéria é identificada quanto ao seu gênero e espécie. Deve-se ter em mente que, os resultados podem variar dependendo das cepas de cada espécie utilizada e do tempo que a bactéria foi mantida na cultura de estoque.
Os resultados observados podem não ser completamente idênticos aos resultados esperados. Portanto, as bactérias que melhor se ajustam aos resultados são escolhidas. As características identificadoras de poucas bactérias deram na Tabela 7.2.
2. Alternativamente, usando os dados acima gravados, os números de código são dados para os resultados registrados (ver Tabela 7.3) e as bactérias identificadas facilmente com a ajuda do programa de computador disponível para Apple II, IBM PC ou TRS-80.
O programa é projetado para identificar as bactérias desconhecidas com base na porcentagem de similaridade entre as bactérias desconhecidas e as bactérias conhecidas com relação às observações acima.
Para iniciar o programa para o Apple II ou IBM-PC:
(a) O disco está inserido na unidade esquerda.
(b) O computador está ligado.
(c) As instruções do programa são seguidas digitando as respostas, número de bactérias desconhecidas e números de código conforme as perguntas aparecem na tela.
Para iniciar o programa para o TRS-80:
(uma) O computador está ligado.
b) O disco é inserido na unidade inferior.
c) O botão laranja é pressionado.
d) Quando perguntado, “data (MM / DD / AA)” é inserido.
e) Botão laranja é pressionado novamente.
(f) As instruções do programa são seguidas de digitação das respostas, número de bactérias desconhecidas e números de código conforme as perguntas aparecem na tela.
E. Métodos Automatizados de Identificação de Bactérias Desconhecidas:
A identificação de bactérias desconhecidas pelo método manual usando reações de coloração, teste de motilidade, características culturais e testes bioquímicos é um processo complicado, demorado e demorado. Para tornar o processo fácil e curto, métodos automáticos foram desenvolvidos.
Esses métodos basicamente usam os mesmos testes bioquímicos usados nos métodos manuais, mas aqui ele é executado de maneira automática e a interpretação é feita com um programa auxiliado por computador.
Dois desses sistemas utilizados atualmente para a identificação automática de bactérias são apresentados da seguinte forma:
1. MINI API System
2. Sistema VITEK 2
F. Confirmação Adicional:
(1) testes sorológicos:
Testes sorológicos podem ser realizados para confirmação adicional das bactérias identificadas. Para uma suspensão das bactérias identificadas (digamos X), uma gota do anti-soro (anti-X) contra essa bactéria é misturada. Se resultar na formação de grumos ou precipitados (complexo X-anti-X), a identificação é confirmada.
Os anti-soros para diferentes bactérias estão comercialmente disponíveis. Eles são produzidos comercialmente em diferentes laboratórios. O anti-soro de bactérias particulares é produzido pela injeção de células mortas ou atenuadas dessas bactérias (digamos X) em um animal de laboratório.
Como mecanismo de defesa, o animal hospedeiro produz anticorpos (anti-X) contra essa bactéria, que permanece no sangue. O sangue é coletado deste animal e seu soro é isolado por técnicas especiais. Este soro, contendo anticorpos contra essa bactéria, é chamado de anti-soro dessa bactéria.
(2) teste de PCR:
O teste de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é um método molecular rápido para confirmação das bactérias identificadas. Esta técnica é muito usada para a detecção de várias bactérias e vírus de forma rápida e precisa.
