Teste de coagulase em bactérias para descobrir suas habilidades para coagular o sangue (com figura)

Teste de coagulase em bactérias para descobrir suas habilidades para coagular o sangue (com figura)!

Princípio:

As cepas patogênicas da bactéria Staphylococcus contêm a enzima coagulase, que atua nos tecidos do hospedeiro para converter o fibrinogênio em fibrina.

A malha de fibrina que é formada envolve as células bacterianas ou os tecidos infectados, protegendo as bactérias de mecanismos não específicos de resistência do hospedeiro, como a fagocitose e a atividade anti-staphylococcal do soro normal.

Esta enzima também ajuda na coagulação do sangue no hospedeiro, sendo um precursor da substância semelhante à trombina, que coagula ou coagula o sangue. O teste de coagulase é realizado para distinguir entre Staphylococcus positivo para coagulase (patogênico ou virulento) e negativo para coagulase (não patogênico ou avirulento).

No teste de coagulase, uma suspensão das espécies de teste de Staphylococcus é misturada com plasma sanguíneo e o plasma inoculado é então periodicamente examinado para formação de fibrina ou coagulação.

A formação de coágulos dentro de quatro horas é interpretada como um resultado positivo e indicativo de uma estirpe de Staphylococcus virulenta (patogénica). A ausência de coagulação após 24 horas de incubação é um resultado negativo, indicativo de uma estirpe virulenta (não patogénica).

Materiais requisitados:

Animal de laboratório (coelho ou porquinho da índia), seringa, anticoagulante (citrato de sódio ou heparina), tubos de coleta de sangue, centrífuga, tubos de ensaio, lâmina de inoculação, bico de bop, câmara de fluxo laminar, frasco descartável, colônias isoladas ou culturas puras de bactérias do gênero Staphylococcus.

Procedimento:

1. A seringa e os tubos de colheita de sangue são lavados com solução de citrato de sódio ou heparina, de modo a evitar a coagulação do sangue imediatamente após a colheita (Figura 7.24).

2. Com a ajuda da seringa, o sangue é coletado de animais de laboratório como coelho ou porquinho-da-índia e colocado nos tubos de coleta.

3. O sangue é centrifugado a 3.000 rpm por 15 minutos em uma centrífuga.

4. O sobrenadante (plasma) é coletado em outro tubo de ensaio citratado e o resíduo (células sanguíneas) descartado.

(a) Método de deslizamento:

1. Duas gotas de uma suspensão das bactérias de teste que pertencem ao gênero Staphylococcus, põem-se em duas metades igualmente divididas de uma corrediça com a ajuda de uma volta de inoculação. Uma gota é usada como 'controle' para ver se a própria bactéria está em grumos e a outra gota é usada como 'teste'.

2. Para a "gota de teste", uma gota de plasma coletado é adicionada, misturada e incubada à temperatura ambiente.

3. As gotas são observadas em intervalos de uma hora até 4 horas.

b) Método do tubo:

1. Dois pequenos tubos de ensaio são retirados. Um tubo de ensaio está marcado como 'teste' e o outro 'controle'. Em cada tubo de ensaio, são retirados 0, 5 ml da suspensão bacteriana.

2. Ao tubo de teste, 1 ml de plasma é adicionado, misturado e incubado

3. Os tubos são observados em intervalos de uma hora até 4 horas.