Notas de estudo sobre citometria de fluxo avançada
O artigo abaixo mencionado fornece notas de estudo sobre citometria de fluxo avançada.
A citometria de fluxo é a técnica recente desenvolvida nas últimas duas décadas para estudar o conteúdo das células, particularmente a eficiência do empacotamento nuclear. Além do NPE, as características físicas e químicas do conteúdo das várias células e condições patológicas podem ser analisadas rapidamente com a conclusão correta.
Os citômetros de fluxo estão disponíveis no mercado na forma de uma máquina. A máquina consiste de um sistema de fluidos, um sistema óptico para coletar sinais de luz gerados como células que passam pelo laser. A máquina também é fornecida com sistema eletrônico que converte os sinais de luz em sinais eletrônicos proporcionais que são finalmente digitalizados para análise de computador.
Cerca de 5000 células por segundo, medindo individualmente uma após a outra, a partir da suspensão da população heterogênea poderia ser escaneada.
O sofisticado sistema Fludics projetado é fornecido com lasers, ótica, eletrônica e classificação. O sistema Fludics possui um Classificador de Células Ativado por Fluorescência (sistema de fluidos FACS Calibur), durante a classificação ele pode classificar a precisão da contagem de células.
O resultado é alta pureza com recuperação que cai entre a célula única e a recuperação. Ele foi controlado eletronicamente com três botões para selecionar o modo operacional PRIME, STAND BY e RUN. A taxa são controles como Alto; (60 ul / min), médio (35 ul / min) e baixo (12 ul / min).
A excitação e emissão, fluorocromos, filtros e compensação de cor são a parte importante do equipamento. 530/30 O filtro BP mede os sinais emitidos pelo isotiocianato de fluorescência (mancha). Se Phycoerythrin e Popidium Iodide forem usados, então o filtro BP 585/42 é usado. 650 filtros LP são usados se a clorofila de peridinina e o sinal de 7-amino-actinomicina D são gerados.
Os sinais de laser são lidos pelo software de busca celular Becton Dickinson. O detector fluorescente e os filtros de banda devem ser ajustados de acordo com as instruções e requisitos do instrumento. 488 nm Fontes de luz de laser de argônio e filtro de passagem de banda de 623 nm estão comumente presentes em equipamentos.
É também ter sistema para exibir dados e análises. Os parâmetros importantes são histogramas, dados de múltiplos parâmetros e dados do modo de lista e gating. A análise da máquina dos dados com a ajuda de software fornecido e dar histogramas do conteúdo de DNA versus contagem que são exibidos no computador automaticamente (49, 2).
As aplicações do citômetro de fluxo são numerosas e são um benefício para a pesquisa biológica e para as investigações clínicas em muitas doenças humanas. O citômetro de fluxo é usado para o estudo de linhagens de sangue no tecido hemopoítico nas células renais da cabeça de peixes respiradores de ar.
Pode ser fácil distinguir entre a célula tronco hematopoiética pluripotente e o fenótipo da população de linfócitos periféricos maduros funcionais. O uso significativo deste equipamento é estudar a apoptose ou morte celular e também estudar a necrose celular devido à toxicidade de pesticidas.
Devido aos sinais de dispersão de grande angular, é possível resolver linfócitos, monócitos e granulócitos a partir de amostras de sangue total lisado. Também é possível separar as plaquetas do ruído de fundo. É usado para o sistema imunológico e na imunofenotipagem. Ele é usado para estudar a leucemia e linfoma, pesquisa de transplantes, enumeração de reticulócitos e análise do conteúdo de DNA celular.
Devido ao mecanismo de processamento de pulso, é vantajoso na análise do ciclo celular de DNA. A análise de EPN é usada para diferenciar câncer de mama primário e metástase, câncer de cólon primário e metástase do cólon, bem como câncer gástrico e ovariano (Fig. 49.2).
O protocolo utilizado é que as primeiras células foram removidas e fixadas em paraformaldeído a 3%. Eles são permeabilizados com 0, 5% de Triton x 100. O DNA nuclear foi então rotulado com iodeto de popídio após tratamento com RNase usando o kit Cycle Test Plus DNA.
