Experiência para descobrir a capacidade das bactérias para desarboxilato diferentes aminoácidos (com figura)

Experiência para descobrir a capacidade das bactérias para descarboxilar diferentes aminoácidos!

Princípio:

Algumas bactérias têm a capacidade de descarboxilar diferentes aminoácidos para as aminas correspondentes e CO2, uma vez que podem produzir enzimas respectivas 'aminoácido descarboxilase'.

Entre eles, cada bactéria pode descarboxilar apenas alguns dos aminoácidos, enquanto não pode descarboxilar os outros.

Assim, os aminoácidos, que uma bactéria pode descarboxilar e os aminoácidos, o que não pode ser a característica da bactéria. O teste da descarboxilase de aminoácidos é realizado para testar, separadamente, a capacidade de uma bactéria descarboxilar aminoácidos como lisina, ornitina e argentina com produção de C0 ₂ e respectivas aminas como cadaverina, putrescina e agmatina.

Se as bactérias puderem

descarboxilato qualquer um ou mais dos aminoácidos, são produzidas respectivas aminas, que são alcalinas (básicas) e, portanto, aumentam o pH alterando a cor do roxo de bromocresol de amarelo para púrpura.

No teste da descarboxilase de aminoácidos, as bactérias de teste são cultivadas anaerobicamente num meio de caldo contendo glucose, púrpura de bromocresol e um dos aminoácidos. A cor do caldo muda inicialmente de roxo para amarelo devido à queda no pH resultante dos ácidos produzidos pela fermentação da glicose. Se a bactéria tem a capacidade de descarboxilar o aminoácido, a cor do caldo muda de amarelo de volta para o roxo.

Materiais requisitados:

Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, jarra, incubadora, caldo de aminoácido decarboxilase, aminoácidos (lisina, ornitina, arginina), parafina líquida, colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.

Procedimento:

1. Os ingredientes do meio de cultura do amino ácido decarboxilase (contendo glicose e púrpura de bromocresol como componentes principais) ou o seu pó pronto necessário para 400 ml do caldo são pesados e dissolvidos em 400 ml de água destilada num balão cónico de 500 ml. agitando e agitando (Figura 7.11).

2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 7, 2 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se é menor. O frasco é aquecido, se necessário, para dissolver completamente os ingredientes.

3. O caldo de 400 ml é distribuído em quatro balões cónicos de 250 ml, de modo a que cada frasco contenha 100 ml de caldo.

4. A três desses frascos, três aminoácidos, tais como, lisina, ornitina e arginina são adicionados separadamente (0, 5 grama cada) e um é mantido sem qualquer aminoácido para servir como controle. O controle é usado para distinguir entre as mudanças de cor de duas etapas no meio de teste (ou seja, de roxo para amarelo e de amarelo de volta para roxo).

5. Os caldos nos quatro frascos cônicos são distribuídos em quatro conjuntos separados de tubos de ensaio (aproximadamente 10 ml cada), tapados com algodão, cobertos com papel craft e amarrados com fio ou elástico.

6. Os tubos de caldo são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave.

7. Os tubos de caldo são deixados a arrefecer até à temperatura ambiente.

8. A parafina líquida é esterilizada por aquecimento a 180 ° C durante 3 horas num forno de ar quente.

9. A bactéria teste é inoculada assepticamente, preferencialmente em uma câmara de fluxo laminar, no caldo com a ajuda de uma alça de inoculação esterilizada sobre a chama de bunsen. O laço é esterilizado após cada inoculação.

10. A parafina líquida esterilizada é gentilmente vertida assepticamente nos tubos inoculados (cerca de 1 cm de altura no meio) para proporcionar uma condição anaeróbica.

11. Os tubos de caldo inoculados são incubados a 37 ° C numa incubadora e observados diariamente até o teste ser positivo ou por um período máximo de 4 dias.