Experimento Voges-Proskauer sobre bactérias para encontrar sua capacidade de utilizar a glicose (com figura)

Leia este artigo para aprender sobre o teste Voges-Proskauer (teste de VP) em bactérias para descobrir sua capacidade de utilizar glicose com a produção de acetilmetilcarbinol!

Princípio:

Algumas bactérias têm a capacidade de utilizar glicose e convertê-lo em acetilmetilcarbinol (acetoína), que é um produto final neutro.

Estas bactérias inicialmente metabolizam a glicose em ácido pirúvico, que é posteriormente metabolizado através do intermediário metabólico ácido acético em acetilmetilcarbinol (acetoína) e C0 ₂ via via 'butileno glicol'.

O acetilmetilcarbinol é oxidado em diacetil na presença de a-naftol sob condições alcalinas (40 por cento KOH). O diacetil reage com o grupo guanidina da creatina (a partir da peptona utilizada no meio de cultura) para produzir cor rosa-rosa.

No teste de Voges-Proskauer (teste de VP), a bactéria de teste é cultivada em meio de caldo contendo glicose. Se as bactérias tiverem a capacidade de utilizar glicose com produção de acetilmetilcarbinol (acetoína) como produto final neutro, o caldo adquire uma cor rosada rosa após a adição de uma solução de naftol seguido de 40% de KOH.

Materiais requisitados:

Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, jarra de descarte, incubadora, caldo MR-VP (ou caldo de fosfato de glicose), solução VP I (solução reagente de Barritt A) e solução VP II (Solução reagente de Barritt B), colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.

Procedimento:

1. Os ingredientes do meio de cultura MR-VP (contendo glucose como componente principal) ou o pó pronto a perfazer necessário para 100 ml de caldo são pesados e dissolvidos em 100 ml de água destilada num balão cónico de 250 ml, agitando e roda (Figura 7.5). O caldo usado para o teste do vermelho de metila também pode ser usado aqui. Normalmente, o mesmo caldo é usado para ambos os testes (MR e VP) ao mesmo tempo.

2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 6, 9 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se for menor. O frasco é aquecido, se necessário, para dissolver completamente os ingredientes.

3. O caldo é distribuído em cinco tubos de ensaio (aproximadamente 10 ml cada), tapado com algodão, coberto com papel craft e amarrado com fio ou elástico.

4. Os tubos de caldo são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave.

5. Os tubos de caldo são deixados a arrefecer até à temperatura ambiente.

6. As bactérias de teste são inoculadas assepticamente, preferivelmente em uma câmara de fluxo laminar, no caldo com a ajuda de uma alça de inoculação esterilizada sobre a chama de bunsen. O laço é esterilizado após cada inoculação.

7. Os tubos de caldo inoculados são incubados a 37 ° C durante 48 a 72 horas numa incubadora.

8. A soluo de VP I (contendo? -Naftol) vertida para os tubos de caldo (0, 2 ml cada) e misturada completamente.

9. A solução de VP II (contendo KOH) é adicionada aos tubos de caldo (0, 6 ml cada), misturada completamente e deixada em repouso durante 30 minutos a 2 horas.