Teste de desaminização de fenilalanina em bactérias para descobrir a sua capacidade de desaminar o aminoácido (com figura)

Leia este artigo para aprender sobre o teste do deaminize da fenilalanina em bactérias para descobrir a sua capacidade de desaminar o Aminoácido!

Princípio:

Algumas bactérias têm a capacidade de desaminar o aminoácido fenilalanina, pois podem produzir a enzima 'fenilalanina deaminase'.

Esta enzima desamina a fenilalanina removendo o seu grupo amino, produzindo assim o ido fenilpirico (um cetoido) e amia (NH3). Ácido fenilpirúvico forma cor verde com solução de cloreto férrico.

No teste da fenilalanina desaminase, a bactéria do teste é cultivada em agar inclinado contendo fenilalanina. Se as bactérias tiverem a capacidade de desaminar a fenilalanina, a cor das lâminas mudará de amarelo para verde, ao deixar cair a solução de cloreto férrico sobre ela.

Materiais requisitados:

Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, jarra, incubadora, agar de fenilalanina, solução de cloreto férrico (10%), colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.

Procedimento:

1. Os ingredientes do meio agar de fenilalanina (contendo a fenilalanina como componentes principais) ou o seu pó pronto necessário para 100 ml do meio são pesados e dissolvidos em 100 ml de água destilada num balão cónico de 250 ml, agitando e agitando ( Figura 7.17).

2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 7, 2 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se é menor.

3. O balão é aquecido para dissolver completamente o ágar no meio.

4. Antes de solidificar, o meio em estado de fusão quente é distribuído em 5 tubos de teste (aproximadamente 20 ml cada).

5. Os tubos de ensaio são revestidos de algodão, cobertos com papel craft e amarrados com fio ou elástico.

6. Eles são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave.

7. Após a esterilização, eles são removidos da autoclave e mantidos em uma posição inclinada para resfriar e solidificar o meio, de modo a obter agar de fenilalanina inclinado.

8. A bactéria de teste é inoculada assepticamente, preferivelmente em uma câmara de fluxo laminar, através de estrias na superfície das inclinações com a ajuda de uma alça esterilizada por chama. O laço é esterilizado após cada inoculação.

9. As lâminas inoculadas são incubadas a 37 ° C por 24 a 48 horas em uma incubadora.

10. 4-5 gotas de solução de cloreto férrico (10%) são adicionadas a cada inclinação.