Teste triplo do ferro de açúcar em bactérias para descobrir a capacidade de produzir sulfeto de hidrogênio (com figura)
Leia este artigo para aprender sobre o teste triplo de ferro-açúcar em Bactérias para descobrir a capacidade de produzir Sulfureto de Hidrogênio!
Pretende-se realizar o teste de ferro com açúcar triplo (TSI test), para descobrir a capacidade de uma bactéria utilizar um ou mais dos três açúcares, tais como glicose, sacarose e lactose, bem como a sua capacidade de produzir sulfureto de hidrogénio (H 2 S), que reduz o ferro.
Princípio:
Algumas bactérias têm a capacidade de utilizar um ou mais dos três açúcares, como a glicose, a sacarose e a lactose.
Se qualquer um ou mais dos três açúcares (açúcares triplos) forem utilizados, o ácido é produzido, o que reduz o pH, mudando a cor do vermelho de fenol de vermelho para amarelo.
Além disso, algumas bactérias têm a capacidade de produzir sulfeto de hidrogênio (H 2 S), utilizando compostos de enxofre. O H 2 S assim produzido combina-se com o composto de ferro, o sulfato ferroso, para formar precipitados negros de sulfureto ferroso.
No teste triplo de açúcar de açúcar (teste TSI), a bactéria teste é cultivada em agar inclinado contendo glicose, sacarose, lactose, vermelho de fenol, tiossulfato de sódio e sulfato ferroso. Enquanto o meio contém glicose (isto é, D-glicose ou dextrose) em uma concentração baixa de 0, 1%, a concentração de sacarose e lactose é mantida alta em 1%.
Se as bactérias tiverem a capacidade de utilizar um ou mais dos três açúcares, a cor do meio muda de vermelho para amarelo. Se as bactérias tiverem a capacidade de produzir H2S, o meio adquire uma cor preta. Como três açúcares e um composto de ferro são usados no meio, o teste é chamado teste de ferro triplo de açúcar.
Materiais requisitados:
Tubos de ensaio, frasco cônico, tampões de algodão, agulha de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, jarra de lixo, incubadora, agar tripla de açúcar (TSI), colônias isoladas ou culturas puras de bactérias.
Procedimento:
1. Os ingredientes do meio TSI agar (contendo os três açúcares e o ferro como componentes principais) ou o pó pronto a perfazer, necessário para 100 ml de meio, são pesados e dissolvidos em 100 ml de água destilada num balão cónico de 250 ml. agitando e agitando (Figura 7.7).
2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 7, 4 usando 0, 1 N HCI se é mais ou usando 0, 1N NaOH se for menor.
3. O balão é aquecido para dissolver completamente o ágar no meio.
4. Antes de solidificar, o meio em estado de fusão quente é distribuído em 5 tubos de teste (aproximadamente 20 ml cada).
5. Os tubos de ensaio são revestidos de algodão, cobertos com papel craft e amarrados com fio ou elástico.
6. Eles são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave.
7. Após a esterilização, eles são removidos da autoclave e mantidos em uma posição inclinada para resfriar e solidificar o meio, de modo a obter inclinações de ágar TSI.
8. A bactéria de teste é inoculada assepticamente, preferivelmente em uma câmara de fluxo laminar, nas inclinações, perfurando a parte superior e estriando na superfície das lâminas com a ajuda de uma agulha esterilizada por chama. A agulha é esterilizada após cada inoculação.
9. As lâminas inoculadas são incubadas a 37 ° C por 24 horas em uma incubadora.
Observações:
1 Bumbum amarelo e vermelho com ou sem produção de gás (quebra no ágar):
Bunda ácida e inclinação alcalina foi formada. Aqui apenas a glicose foi usada anaerobicamente (fermentativamente), tornando o butt acid (amarelo). Nenhum outro açúcar foi utilizado. Como a concentração de glicose é menor (0, 1%), a pequena quantidade de ácido produzida na superfície inclinada é oxidada rapidamente, tornando-a alcalina (vermelha).
Além disso, a dominação oxidativa da peptona presente no meio produz NH Y que torna o alcalino inclinado (vermelho). No entanto, na bunda, a condição ácida é mantida devido à redução da disponibilidade de oxigênio e ao crescimento mais lento das bactérias. Assim, a bactéria é glicose positiva.
2 Bumbum amarelo e inclinação amarela com ou sem produção de gás:
Ácido ácido e ácido inclinado foi formado. Aqui, a lactose e / ou sacarose foram fermentados. Como sua concentração no meio é alta, eles produzem grande quantidade de ácidos, resultando em ácido ácido e ácido e mantêm a condição ácida. Assim, a bactéria é sacarose / lactose positiva.
3 Bumbum vermelho e inclinação vermelha:
Nenhum dos três açúcares foi fermentado. Em vez disso, as peptonas foram catabolizadas em condições anaeróbicas e / ou aeróbicas, resultando em uma condição alcalina devido à produção de amônia.
Se ocorrer apenas degradação aeróbica das peptonas, apenas a superfície inclinada se torna alcalina (vermelho). Se houver degradação aeróbia e anaeróbica da peptona, tanto a inclinação quanto a extremidade se tornam alcalinas (vermelhas). Assim, a bactéria é negativa em açúcar.
4 Envernizamento da coronha:
Além de qualquer uma das condições acima, se o escurecimento da extremidade ocorrer, isso indica que a bactéria é capaz de produzir H2S utilizando o enxofre inorgânico (tiossulfato de sódio) presente no meio.
O H 2 S combina-se com o sulfato ferroso no meio para formar precipitados negros de sulfureto ferroso resultando em uma mudança na cor do meio para preto. Assim, as bactérias são positivas para H2S.
5 Nenhum enegrecimento de bunda:
A bactéria não é capaz de produzir H2S utilizando o enxofre inorgânico (tiossulfato de sódio) presente no meio. Assim, a bactéria é negativa em H 2 S.
