Experimento para Cultivar Vírus Animal em Ovo de Pintinho Embrionado (Com Figura)

Experimente cultivar vírus animal em ovo de galinha embrionado!

Princípio:

Os vírus podem crescer apenas em sistemas vivos. Eles não podem crescer em meios não vivos como ágar nutriente ou caldo nutriente. Portanto, seu cultivo precisa de células hospedeiras suscetíveis ao vírus específico.

O vírus, tal como o bacteriófago, que infecta e cresce nas células bacterianas, é cultivado usando culturas de células bacterianas como o sistema vivo.

Por exemplo, o vírus colifago (um bacteriófago) é cultivado usando a cultura da bactéria E. coli. Em contraste, os vírus animais, que infectam e crescem no corpo dos animais, exigem sistemas animais vivos suscetíveis.

Os três sistemas de animais vivos utilizados para o cultivo de vírus animais nos laboratórios são os seguintes:

1. Animais Susceptíveis:

Nesta técnica, o vírus a ser cultivado é permitido crescer no corpo de um animal vivo, como camundongo ou cobaia, que é suscetível a esse vírus. Esta técnica não é mais utilizada tendo sido substituída pelas seguintes técnicas mais recentes, eficientes e econômicas.

2. Cultura de tecidos:

É uma técnica altamente sofisticada. Aqui, células animais conhecidas por serem susceptíveis ao vírus a ser cultivado e também conhecidas por se multiplicarem rapidamente são primeiro isoladas a partir de tecido vivo adequado de um animal. Essas células são colocadas em um recipiente de vidro ou plástico contendo um meio nutricional extremamente rico. As células se ligam à superfície do vaso e continuam se dividindo até que toda a superfície esteja coberta por uma monocamada confluente de células. Isso é chamado cultura de tecidos.

Então, o vírus a ser cultivado é inoculado na cultura de tecido suscetível. O vírus infecta as células vivas da cultura de tecidos, subverte seu mecanismo metabólico e se replica rapidamente, crescendo profusamente nas células.

3. Ovos de Pintinho Embrionados:

Nesta técnica simples e econômica, o vírus a ser cultivado é injetado em um ovo de galinha embrionado. O vírus cresce dentro do ovo vivo e causa doença no embrião, manifestada por vários sintomas da doença (efeitos citopatogênicos) específicos desse vírus. A presença desses sintomas indica o crescimento desse vírus dentro do ovo.

Materiais requisitados:

Dois ovos de galinha embrionados, dispositivo de ovoscopia, iodo de tintura, algodão absorvente, álcool a 70%, uma pequena broca, diluição de 1: 2 do vírus de Newcastle, seringa, vasilador estéril, solução salina estéril, placas de Petri, bico de fluxo laminar, Incubadora

Procedimento:

1. Dois ovos de galinha embrionados são colocados em velas usando um dispositivo de velas para demonstrar a viabilidade do embrião. O embrião é viável, se mostrar movimento em resposta ao calor da luz. Além disso, as posições do saco de ar e dos grandes vasos sanguíneos são determinadas e marcadas na casca do ovo durante a ovoscopia (Figura 8.7).

2. O invólucro é desinfetado sobre o saco de ar com tintura de iodo e depois deixado secar. O mesmo lugar é esfregado com algodão absorvente embebido em álcool a 70%.

3. A ponta de uma broca pequena é esterilizada por imersão em álcool a 70% e, em seguida, em chamas.

4. Usando essa broca, um pequeno orifício é feito assepticamente na casca sobre o saco de ar em uma região distante dos vasos sanguíneos.

5. 0, 2 ml da diluição de 1: 2 do vírus Newcastle é assepticamente injetado na cavidade alantóide de um dos dois ovos usando uma seringa esterilizada. Isto é feito segurando o ovo em uma posição vertical, inserindo a agulha da seringa através do orifício no casco até o seu punho em um ângulo de 45 °, perfurando a membrana do saco de ar e penetrando na cavidade alantóide. Este ovo inoculado com vírus serve como o 'ovo de teste'.

6. Após a inoculação, a agulha é retirada e o orifício no invólucro é selado com um recipiente quente estéril.

7. Utilizando a mesma técnica, 0, 2 ml de solução salina estéril é inoculada no outro ovo de galinha embrionado, que serve como “ovo de controle”.

8. Ambos os ovos são incubados a 37 ° C por 3 a 4 dias em uma incubadora com umidade apropriada.

9. As observações são anotadas todos os dias.

10. Uma vez que a morte tenha sido determinada, o embrião é desalojado de sua concha e o conteúdo derramado em uma placa de Petri e novamente observado.

11. Todos os materiais contaminados são descartados em um béquer contendo pó de branqueamento.

Observações:

1. Os ovos são pintados todos os dias durante a incubação e observados para morte embrionária, como evidenciado pela cessação do movimento, que geralmente ocorre 3 a 4 dias após a inoculação do vírus.

2. Uma vez que a morte tenha sido determinada, o embrião é desalojado de sua concha e o conteúdo derramado em uma placa de Petri. Observa-se lesões necróticas e evidências de hemorragia.

3. O ovo controle é examinado em busca de evidências de efeitos citopatogênicos.

4. As observações são registradas na Tabela 8.2.