Teste de fermentação de carboidratos em bactérias para descobrir sua capacidade de fermentar carboidratos

Teste de fermentação de carboidratos em bactérias para descobrir sua capacidade de fermentar carboidratos!

Princípio:

Algumas bactérias têm a capacidade de fermentar carboidratos, principalmente açúcares. Entre eles, cada bactéria pode fermentar apenas alguns dos açúcares, enquanto não pode fermentar os outros.

Assim, os açúcares, que uma bactéria pode fermentar e os açúcares, que ele não consegue, é a característica da bactéria.

O teste de fermentação de carboidratos é realizado para testar, separadamente, a capacidade das bactérias de fermentar os açúcares como glicose, sacarose, lactose, maltose e xilose, bem como seus derivados alcoólicos como aesculina, salicina, adonitol, dulcitol e sorbitol. Se as bactérias podem fermentar um açúcar ou um derivado de açúcar, o ácido é produzido, o que reduz o pH, mudando a cor do roxo do bromocresol de roxo para amarelo.

Além disso, se for uma "bactéria aerogênica", tanto o ácido quanto o gás (C0 ₂ ) são produzidos, enquanto que, se for uma bactéria ananerogênica, somente o ácido é produzido sem qualquer gás. A produção de gás é indicada pelo seu acúmulo como uma bolha em um tubo de Durham invertido (um tubo de ensaio em miniatura).

No teste de fermentação de carboidratos, as bactérias de teste são cultivadas em meio de caldo contendo um dos açúcares ou derivados de açúcar e roxo de bromocresol. Um tubo de Durham invertido é mantido submerso nele.

Se a bactéria “tem a capacidade de fermentar o açúcar ou o derivado de açúcar, a cor do caldo muda de púrpura para amarelo. Se o acúmulo de gás é visto como uma bolha no tubo de Durham, é uma bactéria acrogênica, enquanto que, se não houver acúmulo de gás, é uma bactéria anaerogênica.

Materiais requisitados:

Tubos de ensaio, tubos Durham, frasco cônico, tampões de algodão, alça de inoculação, autoclave, bico de bunsen, câmara de fluxo laminar, frasco descartável, incubadora, caldo de carboidrato (caldo contendo açúcar específico ou derivados de açúcar como glicose, sacarose, lactose, maltose, xilose, aesculina, salicina, adonitol, dulcitol, sorbitol etc.), colónias isoladas ou culturas puras de bactérias.

Procedimento:

1. Os ingredientes do meio de caldo de hidratos de carbono (contendo o carboidrato necessário e o púrpura de bromocresol como componentes principais) ou o pó pronto para 100 ml do caldo são pesados e dissolvidos em 100 ml de água destilada num balão cónico de 250 ml. agitando e agitando (Figura 7.8).

2. Seu pH é determinado usando um papel de pH ou medidor de pH e ajustado para 6, 8 usando HC1 0, 1N se for mais ou usando NaOH 0, 1N se for menor. O frasco é aquecido, se necessário, para dissolver completamente os ingredientes.

3. O caldo é distribuído em cinco tubos de ensaio (aproximadamente 10 ml cada).

4. Um tubo de Durham é colocado em condições invertidas no caldo em cada tubo de ensaio. Os tubos de Durham contêm ar e flutuam. Durante a esterilização, o vapor quente desloca este ar, devido ao qual eles mergulham no caldo. Assim, não há necessidade de remover o ar de dentro dos tubos de Durham, enchendo-os com o caldo antes da esterilização para mantê-los imersos no caldo.

5. Os tubos de ensaio são revestidos de algodão, cobertos com papel craft e amarrados com fio ou elástico.

6. Os tubos de caldo são esterilizados a 121 ° C (15 psi de pressão) por 15 minutos em autoclave. Alternativamente, 90 ml do meio basal (meio sem o hidrato de carbono) são esterilizados na autoclave e a isto, após arrefecimento, são adicionados 10 ml da solução de hidrato de carbono (10%) esterilizada por filtração por membrana. Isto é particularmente essencial para os carboidratos sensíveis ao calor, que sofrem degradação durante a esterilização por calor.

7. Os tubos de caldo são deixados a arrefecer até à temperatura ambiente.

8. A bactéria de teste é inoculada assepticamente, preferencialmente em uma câmara de fluxo laminar, no caldo com a ajuda de uma alça de inoculação esterilizada sobre a chama de bunsen. O laço é esterilizado após cada inoculação.

9. Os tubos de caldo inoculados são incubados a 37 ° C durante 24 horas numa incubadora.